自 1874 年血細(xì)胞計數(shù)儀計數(shù)室發(fā)明以來，生物學(xué)家一直在通過顯微鏡下的人工檢查來定量分配到載玻片室中的細(xì)胞。這些量化依賴于了解您正在計數(shù)的確切體積。使用血細(xì)胞計數(shù)器計數(shù)細(xì)胞時，以下公式用于將給定表面積/體積中的細(xì)胞計數(shù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞/mL 濃度：

基于圖像的自動細(xì)胞計數(shù)儀利用相同的原理在相機(jī)上定量已知體積的細(xì)胞。這種系統(tǒng)的主要好處是它們可以提供答案的速度和可重復(fù)性。例如，對于大多數(shù)樣品，DeNovix CellDrop 自動細(xì)胞計數(shù)儀上的明場和雙通道熒光計數(shù)不超過 10 秒。手工計數(shù)大多數(shù)樣品并正確計算濃度需要幾分鐘。

手動細(xì)胞計數(shù)的挑戰(zhàn)

手動計數(shù)樣品中的活細(xì)胞需要經(jīng)驗(yàn)來區(qū)分細(xì)胞類型、碎片和紅細(xì)胞。不難想象，實(shí)驗(yàn)室的每個成員都可能以不同的方式解釋同一樣品，從而導(dǎo)致樣品圖像中的細(xì)胞濃度不同。另一方面，自動細(xì)胞計數(shù)儀利用一種算法，其中包含有關(guān)細(xì)胞表征方式的規(guī)則，因此計數(shù)不會因用戶而異。

血細(xì)胞計數(shù)器依靠一種稱為臺盼藍(lán)的比色染色劑來評估細(xì)胞活力。臺盼藍(lán)的作用是進(jìn)入膜受損的死細(xì)胞并將其染成深藍(lán)色。這種染料無法區(qū)分紅細(xì)胞或其他容易被誤認(rèn)為是活細(xì)胞和實(shí)際目標(biāo)細(xì)胞的碎片。這可能導(dǎo)致懸浮液中活細(xì)胞的高估，從而可能扭曲活細(xì)胞的準(zhǔn)確計數(shù)。

為什么自動細(xì)胞計數(shù)可以提高準(zhǔn)確性和效率

作為血細(xì)胞計數(shù)器的替代品，現(xiàn)代細(xì)胞計數(shù)儀（基于圖像的自動細(xì)胞計數(shù)儀）克服了這些問題。這些系統(tǒng)使用先進(jìn)的成像和軟件算法在幾秒鐘內(nèi)分析細(xì)胞計數(shù)和活力。與手動方法不同，自動計數(shù)器：

• 標(biāo)準(zhǔn)化細(xì)胞計數(shù)測量。

• 通過應(yīng)用統(tǒng)一規(guī)則來識別樣品中的細(xì)胞數(shù)量，消除不一致。

• 提供準(zhǔn)確的計數(shù)，沒有用戶偏見。

此外，基于熒光的活力染色為臺盼藍(lán)染色提供了更可靠的替代方案，因?yàn)樗x擇性地僅標(biāo)記有核活細(xì)胞，從而提高了細(xì)胞計數(shù)和活力評估的精度。

像 CellDrop 這樣的自動細(xì)胞計數(shù)儀可以使用一對稱為吖啶橙和碘化丙啶 （AO/PI） 的熒光活力染色劑。這些熒光染色劑的組合根據(jù)細(xì)胞核的存在特異性識別活細(xì)胞和死細(xì)胞，因?yàn)槿玖蟽H與 DNA 結(jié)合。這些污漬不會與紅細(xì)胞或未成核的碎片相互作用，從而消除了主觀性并提高了精度。

總而言之，基于圖像的自動細(xì)胞計數(shù)儀需要較少的培訓(xùn)和專業(yè)知識來作，同時提高了整個實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞計數(shù)的精度。計數(shù)也可以在手動計數(shù)類似樣品所需時間的一小部分內(nèi)進(jìn)行。通過使用熒光活力染色劑，整個過程得到了進(jìn)一步改進(jìn)。最終，已經(jīng)存在了 150 年的定量方法仍然適用于自動細(xì)胞計數(shù)儀，只是通過現(xiàn)代計算技術(shù)提高了效率。

最后的思考

對于希望提高細(xì)胞培養(yǎng)工作流程準(zhǔn)確性和效率的實(shí)驗(yàn)室來說，自動細(xì)胞計數(shù)儀提供了傳統(tǒng)計數(shù)室的替代方案。通過消除用戶差異、結(jié)合基于熒光的染色并縮短計數(shù)時間，這些設(shè)備可確保以最小的努力精確測量細(xì)胞濃度（以細(xì)胞/mL 為單位）。